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PCR反(fan)應(ying)的特點是具有較大(da)擴增(zeng)能力與(yu)*的靈敏(min)性,但令人(ren)頭痛的問題是易污染(ran),極其微量的污染(ran)即(ji)可造成假陽性的產生。
一、標(biao)本交叉污染源:
收集標本的容器(qi):標本放置時,由于密封不嚴(yan)溢于容(rong)器外,或容(rong)器外粘有標本而造(zao)成相互(hu)間交叉污染;
吸樣(yang)槍(qiang):標本核酸模板(ban)在提取過(guo)程(cheng)中,由于(yu)污(wu)染導(dao)致標本間(jian)污(wu)染;
氣(qi)溶膠:zui可能造成(cheng)(cheng)(cheng)PCR產物污(wu)染(ran)的形(xing)(xing)式(shi)。在空氣(qi)與液體面摩擦時(shi)就(jiu)可形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)氣(qi)溶膠(jiao),在操作時(shi)比較(jiao)劇烈地(di)搖動反(fan)(fan)應(ying)管,開(kai)蓋時(shi)、吸樣時(shi)及污(wu)染(ran)進樣槍的反(fan)(fan)復吸樣都可形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)氣(qi)溶膠(jiao)而污(wu)染(ran)。據計算(suan)一(yi)個(ge)氣(qi)溶膠(jiao)顆粒可含48000拷貝(bei),因而由其造成(cheng)(cheng)(cheng)的污(wu)染(ran)是一(yi)個(ge)值得(de)特(te)別(bie)重視(shi)的問題。
二、PCR試(shi)劑污染源(yuan):
由(you)(you)于在PCR試劑配制過程中(zhong),由(you)(you)加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液等污染而導致的PCR試劑污染。
三、PCR擴增產物污染源(yuan):
PCR反應中zui主要(yao)zui常見的污染源(yuan)。由(you)于(yu)PCR產物拷貝量(liang)大,遠(yuan)遠(yuan)高于(yu)PCR檢測數個拷貝的極限(xian),所以極微(wei)量(liang)的PCR產物污染,就可(ke)造成假陽性(xing)。
四、克(ke)隆質(zhi)粒污(wu)染源:
克(ke)隆(long)質(zhi)粒在單位容積內(nei)含量相當高,活細(xi)胞(bao)內(nei)的(de)質(zhi)粒,由(you)于活細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)繁殖(zhi)的(de)簡便性及(ji)具有很(hen)(hen)強的(de)生命力。故(gu)在分(fen)子生物學實(shi)驗室及(ji)某些用克(ke)隆(long)質(zhi)粒做陽性對照的(de)檢驗室污克(ke)隆(long)質(zhi)粒污染能(neng)性也很(hen)(hen)大。