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         采用 CRISPR/Cas9介導敲入技術構建可量化(hua)生產蛋白質的穩定細胞(bao)系

從植(zhi)物(wu)標(biao)本(ben)中提(ti)(ti)取的(de)(de)(de)(de)(de)DNA是高度(du)片(pian)(pian)段(duan)(duan)化的(de)(de)(de)(de)(de)，因此(ci)(ci)提(ti)(ti)取短DNA分(fen)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)提(ti)(ti)取步(bu)驟非常嚴格。動物(wu)尸體DNA的(de)(de)(de)(de)(de)提(ti)(ti)取方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)和DNA文庫(ku)制(zhi)(zhi)備(bei)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)改(gai)進(jin)，已(yi)經能夠有效提(ti)(ti)取小于50bp的(de)(de)(de)(de)(de)DNA分(fen)子(zi)(zi)片(pian)(pian)段(duan)(duan)。因此(ci)(ci)，德國科學家Rafal M. Gutaker等將(jiang)這(zhe)些改(gai)進(jin)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)應用(yong)到植(zhi)物(wu)標(biao)本(ben)的(de)(de)(de)(de)(de)DNA提(ti)(ti)取，并通過測序評估提(ti)(ti)取性能，該(gai)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)能夠對DNA片(pian)(pian)段(duan)(duan)長(chang)(chang)度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)布進(jin)行準確(que)評估。與(yu)使用(yong)十六烷基(ji)(ji)*基(ji)(ji)溴化銨（CTAB）提(ti)(ti)取相(xiang)比(bi)，使用(yong)N-笨甲酰溴（PTB）緩(huan)沖液提(ti)(ti)取的(de)(de)(de)(de)(de)中間片(pian)(pian)段(duan)(duan)長(chang)(chang)度(du)減少(shao)35%，改(gai)進(jin)DNA與(yu)硅膜的(de)(de)(de)(de)(de)結合(he)條件可(ke)以額(e)外減少(shao)10%。他們并未(wei)觀(guan)察(cha)到單鏈DNA長(chang)(chang)度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)進(jin)一步(bu)降(jiang)低和雙鏈DNA文庫(ku)的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)。這(zhe)種方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)能夠從植(zhi)物(wu)標(biao)本(ben)中提(ti)(ti)取超短分(fen)子(zi)(zi)，這(zhe)將(jiang)幫(bang)助開啟儲存在標(biao)本(ben)室的(de)(de)(de)(de)(de)遺(yi)傳信息。

 原(yuan)文：

Rafal M. Gutaker , Ella Reiter , Anja Furtwängler . Extraction of ultrashort DNA

molecules from herbarium specimens. BioTechniques 62:76-79 (February 2017).