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一、定義：
牛血清白(bai)蛋白(bai)（BSA），是(shi)牛血清(qing)中的一種球蛋白(bai)，包含(han)607個氨基酸殘基，分子(zi)量為66.446KDa，等(deng)電(dian)點(dian)為(wei)4.7。牛血(xue)清(qing)白蛋白在(zai)生化(hua)實(shi)驗中有廣泛的應用。
二、主要成分
1、蛋白質
是(shi)牛血清中主(zhu)要成份。除包括可攜帶金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)、脂肪酸和自(zi)身是(shi)激(ji)素(su)類蛋(dan)白外主(zhu)要還有(you)白蛋(dan)白，球蛋(dan)白。纖(xian)維粘連(lian)素(su)細胞(bao)促進細胞(bao)附(fu)著(zhu)；α2巨(ju)球(qiu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)抑制胰蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶的(de)作用；胎牛血清中含胎球(qiu)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)促細(xi)胞(bao)附著；轉鐵蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)能結合(he)鐵離子，減少其(qi)毒性(xing)和被細(xi)胞(bao)利用。
2、多肽
血小板(ban)促(cu)(cu)生(sheng)長(chang)因(yin)子能促(cu)(cu)細(xi)胞分裂，是多肽(tai)家庭的(de)主(zhu)要成(cheng)員之一(yi)(yi)，是主(zhu)要的(de)促(cu)(cu)細(xi)胞增殖因(yin)子；成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞生(sheng)長(chang)因(yin)子、表皮(pi)細(xi)胞生(sheng)長(chang)因(yin)子、神經細(xi)胞生(sheng)長(chang)因(yin)子等，血清中含量雖很少，但對細(xi)胞生(sheng)長(chang)也有一(yi)(yi)定作用(yong)。
3、激素
激素對(dui)細胞的(de)作(zuo)用是(shi)多方面的(de)。
胰島素：促進細(xi)胞攝取葡萄糖和(he)氨基酸(suan)，與促細(xi)胞分裂(lie)有關(guan)。
類胰(yi)(yi)島(dao)素生長因子：能與細胞(bao)表達的(de)胰(yi)(yi)島(dao)素受體結合(he)，從而有胰(yi)(yi)島(dao)素同樣的(de)作用。
促生長激素(su)：促細胞增殖效應。
4、其他成份
氨基(ji)酸、葡(pu)萄(tao)糖、酮酸等對多種(zhong)營養成分(fen)的(de)合成培養基(ji)意義不大。與蛋白相結合狀態的(de)微(wei)量元素對細胞培養有意義。
三、作(zuo)用
BSA一般做為穩(wen)定劑(ji)被用于限制酶或者修飾酶的(de)保存溶液和反應液中，因為有些酶在(zai)低濃度下不穩(wen)定或活性低。加(jia)入BSA后，它可能起到“保護”或“載體(ti)”作用(yong)，不少(shao)酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入(ru)BSA一般(ban)不會受(shou)到什么影響。對多(duo)數(shu)底物DNA而(er)言(yan)，BSA可以(yi)使酶切更*，并可實現重復切割(ge)。在37℃，酶切反應超過1h時，BSA可以使酶更加穩定，因為在不含BSA的(de)反(fan)應緩(huan)沖液中(zhong)，許多(duo)限制性內(nei)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至(zhi)更短(duan)的時間(jian)。而BSA可以結合緩沖液(ye)或底物(wu)DNA中抑制限制性內切酶活性的金屬(shu)離(li)子(zi)和其它化學物質。
緩沖液
1.BSA是酶的穩(wen)定劑，防(fang)止酶的分解和非特異性吸附；
2.BSA能減輕有些酶(mei)的變性(xing)，能減輕有些不利(li)環境(jing)因素如加熱，表面張力及化學(xue)因素引起的變性(xing)的，可能是因為它結構中有17個(ge)二硫鍵，和一(yi)個(ge)巰基，巰基的(de)化(hua)學反應很活潑，二硫鍵有(you)抗氧化(hua)還(huan)原的(de)作(zuo)用，因此可與多種陽離(li)子，陰離(li)子和小分(fen)子結合；
3.BSA能防(fang)止酶吸附到管壁而損(sun)失。
四、用途
1、用于生化研(yan)究、遺傳(chuan)工程和醫藥(yao)研(yan)究
2、用作醫藥保健食品、調味品
3、維持滲透壓、pH緩沖(chong)、載體作(zuo)用
4、在PCR體系中有(you)助于Taq酶的穩定性(xing)及活(huo)性(xing)，可以提高PCR的效率
五、儲存方法
每10克加100毫升水進(jin)行溶解，或用 PBS溶解也可，視(shi)用途而決定。然(ran)后分裝(zhuang)成小支。若不(bu)使用防腐(fu)劑(ji)可貯存(cun)在(zai)零下20或30攝(she)氏度的恒(heng)溫柜(ju)中，若使(shi)用防腐劑(ji)則可貯存在零上4攝氏度的環境下。一般可存(cun)放(fang)數月(yue)不(bu)變(bian)質。防腐劑可能對牛血清白蛋白的效果造成影響，應慎用。
六、應用
牛血清(qing)白蛋白（BSA）在生化實(shi)驗(yan)中有廣泛的(de)應用(yong), 例如在WB實(shi)驗中加(jia)入BSA, 通過提高溶液中(zhong)蛋白(bai)質的(de)(de)濃度，對(dui)酶起保護作用。防(fang)止酶的(de)(de)分(fen)解和非特異性(xing)吸附，能減輕(qing)有些(xie)酶的(de)(de)變性(xing)，減輕(qing)不(bu)利環境因素如加熱，表(biao)面張力及化學(xue)因素引起的(de)(de)變性(xing)的(de)(de)。
1、測定(ding)蛋白濃度
按(an)50：1配置(zhi)BCA工作液。10ulC液(ye)（蛋(dan)白標準）+90ulPBS液稀釋成(cheng)0.5mg/ml的蛋(dan)白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準(zhun)孔中(zhong)，在其他樣品孔中(zhong)加入10ul待(dai)測(ce)樣品。分別(bie)加PBS定(ding)容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時。用(yong)酶標(biao)儀測(ce)定蛋白濃度：測(ce)定A562，依標準曲線算出蛋白濃度。
2、SDS-PAGE電泳
（1）制(zhi) 膠: 按(an)比例配(pei)制分離膠，緩(huan)(huan)緩(huan)(huan)地搖動溶(rong)液(ye)，使激活劑混合均勻，將凝(ning)(ning)膠溶(rong)液(ye)平緩(huan)(huan)地注入兩層玻璃極中，再在(zai)液(ye)面上小心注入一(yi)層水，以阻止氧氣進(jin)入凝(ning)(ning)膠溶(rong)液(ye)中，靜置40min。同前按比(bi)例(li)配制濃縮(suo)膠，但混勻溶液時(shi)不要過于劇烈以(yi)免引入過多地氧氣。吸去不連續(xu)系統中下(xia)層(ceng)分(fen)離膠上的水分(fen)，連續(xu)平(ping)穩的注(zhu)入凝膠溶液，然后小(xiao)心插(cha)入梳子(zi)并(bing)注(zhu)意不得在齒尖留有氣泡，靜制60min以上以保證*聚(ju)合(he)。
（2）預電泳： 將聚(ju)合好(hao)的凝膠安置于(yu)電泳槽中，小心拔去(qu)梳子，加入(ru)電泳緩沖液后低電壓(ya)10-20V的預電泳20-30min。（目的(de)是清除(chu)凝膠內(nei)的(de)雜質(zhi)， 疏通凝膠孔徑(jing)以(yi)保證(zheng)電(dian)泳過程中電(dian)泳的暢(chang)通）。
（3）樣(yang)品準備(bei)：首先計(ji)算上樣(yang)體(ti)積(ji)，然后按樣(yang)品：上樣(yang)buffer=4：1的比(bi)例加(jia)入上(shang)樣bufer混勻，沸水(shui)10分鐘，冰上5分鐘。
（4）加 樣： 預(yu)電(dian)泳后依次加入標準品（Marker）和待分析樣品(pin)。（加(jia)(jia)樣時間(jian)要(yao)盡量短，以免樣品(pin)擴(kuo)散，可(ke)在未加(jia)(jia)樣的孔中加(jia)(jia)入等量的樣品(pin)緩沖(chong)液避(bi)免邊緣效(xiao)應。每個泳道加(jia)(jia)5ul 。
（5）電 泳(yong)： 加樣完畢，選擇80V恒壓進行(xing)電泳，電泳直至(zhi)溴(xiu)酚藍染料前(qian)沿到達兩膠交界(jie)處（一般約20分(fen)鐘），更(geng)換至100V恒(heng)壓電泳(yong)，電泳(yong)直至(zhi)溴酚(fen)藍染(ran)料前(qian)沿下(xia)至(zhi)凝膠末端處(chu)，即停止電泳(yong)（一般(ban)約(yue)為(wei)1小時20分鐘）。
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